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        帶你了解ELISA實驗的基本知識

        更新時間:2023-05-30 點擊量:696

        上海滬鼎生物科技有限公司是國內ELISA試劑盒優質供應商,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進口/國產ELISA試劑盒,專業供應科研實驗所需的培養基,抗體,動物血清血漿,標準品對照品,化學試劑,酶聯免疫試劑盒,白介素試劑盒,金標檢測試劑盒,微生物,蛋白質,ELISA種屬涵蓋廣,憑借多年行業經驗,完善的售后服務,高質量的產品。


        基本類型:

            酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) :是酶免疫測定技術中應用的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,后者用于測定特異抗體。


        用途:

            根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱為布ELISA(C-ELISA)。在微量板ELISA中,又根據其性質不同分為間接ELISA、雙抗體夾心ELISA、雙夾心ELISA、競爭ELISA、阻斷ELISA及抗體捕捉ELISA。


        操作程序:

        1、間接ELISA

            本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下:

        (1) 材料

        ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;

        ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;

        ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。

        (2) 方法步驟

        ① 加抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

        ② 加待檢血清 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干

        ③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時,洗滌三次、拋干

        ④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘,加終止液

        ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值,并計算出P/N比值。

        (3) 結果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,而且已知陽性血清的OD值≥0.4;在上述條件成立的情況下,如果待檢血清與已知陰性血清的比值(P/N)≥2.1,而且待檢血清的OD值≥0.4,則判為陽性,否則判為陰性。

        2、雙抗體夾心ELISA

            本法主要用于檢測大分子抗原?,F以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。

        ① 加抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

        ② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干

        ③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干

        ④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘,加終止液

        ⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

        3、雙夾心ELISA

            此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于:它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標記每一種抗體,還可提高試驗的敏感性。

        此法的基本程序為:

        ① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

        ② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ③ 加用非同種動物生產的特異性抗體(Ab-2)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ④ 加入酶標抗Ab-2抗體(AB-3)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

        ⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。

        4、競爭ELISA

            此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。

        其基本程序為:

        ① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

        ② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

        ④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

           被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定,如果待檢溶液中抗原越多,被結合的標記抗原的量就越少,有色產物就減少,這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記,而且因為抗原的結構不同,還需應用不同的結合方法。此外,試驗中應用酶標抗原的量較多。

        5、阻斷ELISA

        本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬?。≒R)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。

        下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:

        ① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干

        ② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干

        ⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干

        ⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液

        ⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。

           本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。


             針對以上技術資訊內容,如果您有不太清楚或者了解更多信息(包括基本信息/技術資料/解決方案),都可以隨時聯系我司業務員。我司提供的ELISA試劑盒種屬齊全,質量有保障!提供全程技術指導及免費代檢測服務。


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